Тромбоцити. Методи підрахунку, клінічне значення
З’являються дегенеративні форми з різко виявленими явищами анізоцитоза і пойкілоцитоза, малою зернистістю або її повною відсутністю, вакуолізацією протоплазми і значною кількістю незрілих форм (з рештками сітківки в протоплазмі, відривками ядерних включень і т.д.).
В практиці при підрахунку тромбоцитів використовують методи, покладені на два принципи: 1) безпосередній підрахунок в крові (за допомогою лічильної камери або лічильника і 2) підрахунок в мазках крові на відповідну кількість еритроцитів з перерахунком на 1 мкл або 1 л загально кількості еритроцитів в крові. Кожна група методів має перевагу і недоліки. Метод першої групи має перевагу в більшій точності.Безпосередній підрахунок тромбоцитів в крові зручний ще і тому, що не потребує для розрахунку даних про кількість еритроцитів, але підрахунок в камері більше трудомісткий, оскільки тромбоцити в нативному вигляді є дрібними і погано контрастованими елементами. Недоліком цих методів є необхідність підрахунку тромбоцитів в найближчий час після взяття крові. Підрахунок тромбоцитів в мазках крові значно уступає по своїй точності методам безпосереднього підрахунку в камері або за допомогою лічильників і автоматів. Помилки при підрахунку в мазках крові можуть бути обумовлені деякими причинами: погана якість мазка і зв’язане з цим нерівномірне розприділення тромбоцитів, неточний підрахунок еритроцитів в крові. Незручність методу – необхідність одночасного підрахунку тромбоцитів і еритроцитів в крові. Перевага його – можливість підрахунку тромбоцитів в любий час незалежно від моменту взяття крові. В якості уніфікованих затверджено два методи, засновані на обох принципах.
Уніфікований метод підрахунку в камері. Принцип. Підрахунок тромбоцитів в 1 мкл (або 1 л) з урахуванням розведення крові і об’єму квадрата лічильної сітки із застосуванням фазово-контрастного приладу для контрастування тромбоцитів.
1.Реактиви. Застосовують реактив 1 або 2.
1.Кокаїн гідрохлорид – 3 г, натрій хлорид – 0,25 г, фурацилін – 0,025 г, дистильована вода – 10 мл.
2.1% розчин оксалата амонію. Розчин кип’ятять і фільтрують. Зберігають в холодильнику. Порівнювальний аналіз дозволив рахувати кращим 1% розчин оксалата амонію, так як він дає швидкий і повний лізис еритроцитів.
Розводять досліджувальну кров в 200 раз; для цього в суху пробірку набирають 4 мл реактиву 1 або 2 і 0,02 мл крові.
Переміщують і залишають на 25-30 хв. для гемолізу еритроцитів. Готують лічильну камеру. Переміщують розведену кров і заповнюють камеру; підносять краплю її за допомогою скляної палочки або пастерівської піпетки до краю покривного скла, слідкуючи за тим, щоб кров рівномірно без пухирців повітря заповняла всю поверхню сітки, не затікаючи в рівчики. Кладуть лічильну камеру у вологу камеру на 5 хвилин для осідання тромбоцитів (чашка Петрі з викладеним по краях, змоченою водою, фільтрувальним папером. Готують фазово-контрастний прилад в відповідності з інструкцією.
Проводять підрахунок тромбоцитів в 25 великих квадратах.
Тромбоцити виглядають в лічильній камері у вигляді дрібних утворень.
Розрахунок числа тромбоцитів проводять, виходячи із розведення крові, числа порахованих квадратів (25) і об’єму одного великого квадрата (мкл, так як сторона квадрата мм, висота мм).
Х – число тромбоцитів в 1 мкл крові;
а – число тромбоцитів, порахованих в 25 великих квадратах.
Практично число підрахованих тромбоцитів множать на 2000.
Уніфікований метод підрахунку в межах крові (по Фоніо). Принцип. Метод побудований на підрахунку числа тромбоцитів в фарбованих мазках на 1000 еритроцитів з розрахунку на 1 мкл (або 1л) крові, виходячи із вмісту в цьому об’ємі кількості еритроцитів.
Реактиви. Застосовують реактив 1 або 2 14% р-н сульфату магнію. 2. 6% розчин етилендиамінтетрацетата натрію (ЕДТА). Змішують кров з реактивом 1 або 2, для цього взятий капіляром Панченкова реактив до мітки “75” вносять в пробірку, потім добавляють кров, взяту тим же капіляром, до мітки “0”. Вміст пробірки перемішують і готують тонкі мазки. Фіксують і фарбують по Романовському – Гімзе на протязі 2-3 г (при використанні реактиву 1) і на протязі 30-45 хв (при використанні реактиву 2). Сухі мазки дивляться під мікроскопом з імерсійним об’єктивом, підраховуючи кількість тромбоцитів в тонких місцях препарату (еритроцити повинні бути розміщені ізольовано). Тромбоцити в мазках виглядають у вигляді фіолетових круглих утворень розміром 2-4 мкм з чітко видимою центральною розміщеною зернистою частиною – грануломером і більш світлою периферичною незернистою зоною – гіаломером.