Спектральний аналіз. Спектроскопія у видимій і ультрафіолетовій області
Спектроскопія (спектральний аналіз) — область фізики, використовувана для ідентифікації з'єднань, дослідження складу, будови і кількісного аналізу індивідуальних речовин і багатокомпонентних систем.
У органічній хімії або біохімії практично жоден експеримент не обходиться без застосування спектроскопічних методів. Вони широко використовуються для ідентифікації продуктів хімічних і ферментативних реакцій або складніших біологічних процесів виявлення проміжних з'єднань (і тим самим для отримання цінної інформації про механізми перетворень), дослідження кінетики і стереохімії хімічних реакцій, просторової структури і динаміки молекул і надмолекулярних систем, з'ясування будови знов виділених природних з'єднань і т.д.
Спектроскопія в оптичній області спектру (ультрафіолетова, видима, інфрачервона) використовується перш за все в наступних випадках: 1) для визначення концентрації; 2) ідентифікації речовини; 3) визначення числа частинок в розчині (наприклад за допомогою ізобестичних крапок).
Фізичні основи методу.
З курсу загальної фізики відомо, що будь-яке електромагнітне випромінювання пов'язане з процесами, що відбуваються в атомах або молекулах. Здатність випромінювати і поглинати електромагнітне випромінювання є загальною властивістю всіх атомів і молекул. Випромінювання (поглинання) вельми виборче, тобто випромінювання тільки певної довжини хвилі даною молекулою інтенсивно поглинається, тоді як випромінювання інших довжин хвиль поглинається слабо або зовсім не поглинається. Крива залежності поглинання від довжини випромінюваної хвилі (або частоти випромінювання) називається спектром поглинання речовини, який є специфічною характеристикою даної речовини.
Залежно від агрегатного стану речовини спектри розділяються на три групи: лінійчатий (для газів при низькому тиску, що складається з одноатомних молекул); смугастий (для газів, пари, рідин, що складаються з багатоатомних молекул) і суцільний (для розжарених твердих і рідких тіл). Якщо поглинач—тверде тіло (стекло, пластмаси і інше), області поглинання широкі і межа смуги поглинання, як правило, не різка. Для молекулярних рідин, розчинів і пари області поглинання спостерігаються у вигляді смуг, які несуть інформацію про будову досліджуваних речовин і їх концентрації. Зміни спектру дозволяють зробити висновки про процеси, що відбуваються в речовині.
При дослідженні лікарських органічних сполук важливе місце займає молекулярний спектральний аналіз (МСА). У його основі лежить якісне і кількісне порівняння спектру досліджуваного зразка із спектрами інших речовин.
У спектрофотометричних методах застосовуються спектрофотометри — прлади, що дозволяють проводити аналіз як забарвлених, так і безбарвних з'єднань по виборчому поглинанню монохроматичного випромінювання у видимій, ультрафіолетовій (УФ) і інфрачервоній (ГИК) областях спектру.
Для збудження електронних переходів молекул звичайно необхідне видиме або ультрафіолетове випромінювання. Низькоенергетичне інфрачервоне випромінювання порушує коливальні переходи в атомній підсистемі молекул, тоді як чисті обертальні переходи при обертанні молекули як цілого спостерігаються в ще менш енергетичних мікрохвильових і радіочастотних діапазонах.
Таким чином, природа смуг поглинання (молекулярних спектрів) в УФ і видимої частинах спектру пов'язана з різними електронними переходами в поглинаючих молекулах і іонах (електронна спектроскопія). У ГИК області вона пов'язана з коливальними переходами в молекулах (коливальна спектроскопія). У МСА розрізняють також спектри комбінаційного розсіяння світла (КРС) і спектри флуоресценції.
Використовувана в даний час апаратура дозволяє вимірювати УФ-СПЕКТРИ в області від 190 до 380 нм, видимі—від 380 до 780 нм, ІК-СПЕКТРИ — від 780 нм до 1 мм.
Кількісний МСА, пов'язаний з вимірюванням поглинання електромагнітного випромінювання, заснований на законі Бугера—Ламберта—Бера, що встановлює зв'язок між інтенсивностямі падающего/0 і прошедшего/ через речовину світла залежно від товщини / поглинаючого шару і концентрації з речовини.
Молярний показник поглинання е(е' = 0,43е) є специфічною фізичною константою для кожної речовини і може бути використаний в цілях його ідентифікації. Його визначення дозволяє встановити вміст даної речовини в розчинах невідомої концентрації на основі вимірювання оптичної густини.Закон Бугера—Ламберта—Бера строго не виконується, якщо падаюче випромінювання немонохроматічно (колориметричний і фотоколориметричний аналіз). В даному випадку цей закон застосовний з великим або меншим наближенням залежно від ступеня постійності оптичної густини в досліджуваному інтервалі довжин хвиль. Відхилення від закону Бугера—Ламберта—Бера спостерігаються також в наступних випадках: 1) якщо різні форми поглинаючих частинок знаходяться в рівновазі, як, наприклад, у разі таутометрії або кислотно-основної рівноваги; 2) якщо системи мають явно виражену тенденцію до асоціації молекул розчиненої речовини між собою, або між молекулами розчиненої речовини і розчинника. Взаємодія розчиненої речовини з розчинником широко поширена, і його сліди можна спостерігати в кожному спектрі.